Бронхиальная астма – гетерогенное заболевание, которое характеризуется хроническим воспалением дыхательных путей и диагностируется по респираторным симптомам свистящего дыхания, одышки, стеснения в груди или кашля, вариабельных по длительности и интенсивности, в сочетании с лабильной обструкцией дыхательных путей [1].
Астма является одним из основных неинфекционных заболеваний, от которого страдают все люди вне зависимости от возраста и пола. На развитие бронхиальной астмы влияет огромное количество факторов, как внутреннего происхождения, такие как генетическая предрасположенность, пол и ожирение, так и внешнего, различные аллергены, инфекционные агенты, различные аэрополлютанты. На основании патогенеза бронхиальной астмы выделяют два ее типа: атопическую, также известную как аллергенную, и неатопическую, то есть неаллергическую.
Развитие бронхиальной астмы приводит к чрезмерному сокращению гладких мышц, утолщение стенок бронхов, рассинхронизации работы гладкой мускулатуры легких, сужению дыхательных путей, обструкции легких и нарушению дыхания.
На основании всей совокупности факторов бронхиальная астма представляет огромный интерес для изучения с целью выяснения точных механизмом возникновения, которые на данный момент достоверно не известны, и разработки новых, более совершенных методов лечения и профилактики. Особый интерес представляет атопический тип бронхиальной астмы в связи с постоянной напряженной экологической обстановкой в атмосфере. Для изучения атопической БА используются различные методики моделирования бронхиальной астмы на лабораторных животных, однако определение хода протекания и развития заболевания на основе наблюдения за симптоматикой болезни достаточно проблематично. Поэтому используются биохимические маркеры, которые точно дают понять состояние модельного объекта и влияние патологии на него [1-4].
В этой работе будут освещены основы количественного определения этих самых иммунологических маркеров.
Определение показателя клеточного иммунитета
Клеточный иммунитет неотъемлемая часть иммунного ответа организма на действие различных аллергенов. В случае атопической бронхиальной астмы, которая как раз и является следствием гиперреакции иммунной системы в легких, клеточные элементы – лейкоциты, такие как нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, альвеолярные макрофаги и тучные клетки увеличиваются в количестве и начинают миграцию в очаг воспаления, то есть бронхи. Общегематологический анализ позволяет определить их содержание в образце крови модельного объекта или пациента [1-3].
Для исследования может использоваться как венозная, так и капиллярная кровь, при этом использование венозной крови предпочтительнее.
В настоящее время клинический анализ крови чаще всего выполняется на гематологическом анализаторе – высокотехнологичном приборе, способном определять и автоматически рассчитывать более 30 характеристик крови, в том числе осуществлять подсчет форменных элементов, включая основные популяции лейкоцитов [5]. Принцип работы гематологических анализаторов основан на прохождении суспензии клеток через чувствительный элемент – лазерный луч или электрический ток. Каждая клетка преломляет лазер или меняет сопротивление электрического тока, эти изменения пропорциональны размеру клетки, на чем и основано их различение анализатором.
При наличии отклонений по результатам исследования на гематологическом анализаторе производится морфологическое изучение мазка крови. Для визуального подсчета форменных элементов одну-две капли крови капают на предметное стекло, другим стеклом одним движением размазывают её тонким слоем и фиксируют специальными веществами. Затем мазки окрашиваются красителями для удобства различения и визуализации клеток и изучаются под микроскопом. По стандарту подсчет проводят на сто клеток и полученные цифры записывают в процентах. Зная общее количество лейкоцитов, проценты можно пересчитать в абсолютные значения, которые гораздо более объективно отражают состояние лейкоцитарной популяции [6].
Количественное определение показателей гуморального иммунитета
Для количественного определения цитокинов в крови можно использовать два метода: иммунохимический (ИФА) и биотестирование [7, 8]. Биотестирование считается самым чувствительным методом, но по точности и специфичности анализа заметно уступает ИФА. В целом ИФА получило наибольшее распространение как раз из-за своей скорости и точности, которые позволяют проводить анализ практически на любое белковое вещество, в том числе цитокины, иммуноглобулины и факторы некроза, которые как раз и являются ключевыми веществами в иммунологическом исследовании. Биотестирование же чаще всего проводится для подтверждения результатов ИФА или для конкретных исследовательских целей.
ИФА исследование следует проводить по протоколу, который прилагается в коммерческом комплекте реагентики.
В качестве анализируемого вещества можно использовать любые организменные жидкости тестового объекта, в том числе и образцы крови.
В целом ИФА является главным методом для количественного определения показателей гуморального иммунитета[8].